三種方法提取當歸揮發油的氣相色譜-質譜比較
作者：李偉東， 楊光明， 蔡寶昌，狄留慶【關鍵詞】 揮發油
摘要：【目的】比較常壓水蒸氣蒸餾(NPSD)、減壓水蒸氣蒸餾(VDS)和超臨界ＣＯ２萃取(SFEＣＯ２)法所提取當歸揮發油的化學成分及其含量。【方法】采用氣相色譜-質譜聯用技術(ＧＣＭＳ）進行分析。【結果】3種提取方法所提取的揮發油無論在成分還是在含量上均存在一定差異。【結論】以ＳＦＥＣＯ２法提取效率高，提取成分較完全，為提取當歸揮發油的理想方法。
關鍵詞：當歸／化學；揮發油； 氣-質聯用；超臨界ＣＯ２； 常壓水蒸氣蒸餾法； 減壓水蒸氣蒸餾法
當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis(Oliv)Diels的干燥根，主產于甘肅、云南、四川等地，具有補血、活血、調經、鎮痛等作用［１］。當歸的化學成分為揮發油和水溶性成分。其中當歸揮發油具有鎮靜大腦、興奮和麻痹延髓中樞的作用，并可弛緩子宮肌肉，治療月經不調、痛經等病癥。因此，當歸揮發油的成分值得研究。目前有關采用氣相色譜-質譜聯用(ＧＣＭＳ）分析當歸揮發油成分的研究較多［2-3］，但以ＧＣＭＳ聯用技術對常壓水蒸氣蒸餾法(NPSD)、減壓水蒸氣蒸餾法(VSD)和超臨界ＣＯ２萃取法（ＳＦＥＣＯ２)所提取的當歸揮發油的化學成分及其含量進行比較的研究則未見報道。我們采用ＧＣＭＳ對這3種提取方法提取的當歸揮發油成分進行了比較分析，報導結果如下。
1 材料與儀器
11 材料
當歸購于江蘇省藥材公司，經本校陳建偉教授鑒定為忍冬科植物忍冬Angelica sinensis(Oliv)Diels的干燥根。粉碎過20目篩備用。
12 儀器
HA9548型超臨界萃取裝置(華安超臨界萃取有限公司)；HP６８９０ＧＣ／５９７３Ｎ ＭＳ氣相色譜-質譜聯用系統(美國安捷倫公司)。
2 樣品制備
21 常壓水蒸氣蒸餾法
取一定量當歸藥材，參照2000年版《中國藥典》一部附錄XD的方法用常壓水蒸氣蒸餾法提取揮發油，提取時間6h，其收率為082%，用乙醚溶解稀釋后供ＧＣＭＳ分析用。
22 減壓水蒸氣蒸餾法
取一定量當歸藥材，參照2000年版《中國藥典》一部附錄XD的方法自搭減壓裝置，用減壓法提取揮發油，真空度００７MPa，提取時間6h，收率為069%，用乙醚溶解稀釋后供ＧＣＭＳ分析用。
23 ＳＦＥＣＯ２法
取備用當歸藥材一定量投入萃取釜中，對萃取釜、2個解析釜及貯罐分別進行加熱或冷卻；當萃取釜溫度達到44℃，解析釜Ⅰ的溫度達到46℃，解析釜Ⅱ的溫度為35℃時，打開ＣＯ２氣瓶；當萃取釜壓力為25MPa，解析釜Ⅰ的壓力為8MPa，解析釜Ⅱ的壓力為6MPa時，開始循環萃取；ＣＯ２流量為18kg/h左右，萃取4h后從解析釜出料；收率為15%，用乙醚溶解稀釋后供ＧＣＭＳ分析用。3 測試條件
31色譜條件
色譜柱ＨＰ５ＭＳ ５％Ｐhenyl Methyl Siloxane；柱長：30m；液膜厚度：025μm；內徑：025mm；載氣：He；流速：10mL／min；柱溫：程序升溫40℃～２３０℃（４℃／min)，恒溫25min；柱前壓：828kPa；進樣量2μL。
32 質譜條件
分流模式進樣，分流比40∶1；進樣口溫度：260℃，輔助線溫度：280℃，離子源溫度：230℃，四極桿：150℃；電離方式：EI；電子能量：70eV；電子倍增管電壓：1347kV；采集方式：掃描；掃描質量范圍：50～500amu。
4 結果
取3種方法所提取揮發油，按上述測試條件進行ＧＣＭＳ分析，對每個色譜峰的化合物給出特定的MS峰，經計算機貯存信號的檢索及質譜圖進行解析，確定化合物，并用峰面積歸一化法測定各成分相對百分含量，成分鑒定結果見表1；各方法的氣相色譜總離子流圖見圖1-3。表1 不同方法提取當歸揮發油的成分分析結果（略）
從ＳＦＥＣＯ２法提取的當歸揮發油中共鑒定出38種成分，從NPSD法提取的當歸揮發油中共鑒定出64種成分，從VSD法提取的當歸揮發油中共鑒定出40種成分。3種方法提取的揮發油無論在成分還是含量上均存在一定差異，表現在：首先，保留時間在4～20min之間，ＳＦＥＣＯ２法幾乎沒有出峰，而大量成分集中在30～45min之間出峰；與之相反，常壓水蒸氣蒸餾法則在35min之后幾乎沒有成分被檢出；減壓蒸餾法被檢出的成分數量與SFE法相當。其次，本試驗3種方法主要成分為：3，7二甲基1，3，6辛三烯(1，3，6octatriene,3,7dimethy1)、丁烯基二氫苯酞(butylidene dihydrophthalide)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibuty1 phthalate)和9，12十八碳二烯酸(9，12octadecadienoic acid)，它們在SFEＣＯ２法中占768%，在NPSD法中占6081%，在VSD法中占6337%，而文獻［4］中主要以丁烯基二氫苯酞為主(SFE法占7871%，VSD法占7445%)。
5討論
在比較不同提取方法對化學成分的影響時必須考慮方法間的可比性，故本文所采用的2種水蒸氣蒸餾法的提取時間均為6h，ＳＦＥＣＯ２法提取時間4h與6h的實驗結果無明顯差異。此外，從本文試驗結果看：ＳＦＥＣＯ２法提取當歸揮發油與ＮＰＳＤ及ＶＳＤ法相比較，揮發性成分以及同一成分含量間均存在一定差異；從提取效能和成本考慮ＳＦＥＣＯ２法能顯著提高當歸揮發油得率，縮短提取時間。因此，在提取、富集當歸揮發油的工藝中宜采用ＳＦＥＣＯ２法。
參考文獻：
［1］方洪矩，呂瑞綿，劉國聲，等．揮發油成分的研究Ⅱ・中國當歸與歐當歸主要成分比較［Ｊ］．藥學學報，1979，14(10)：617．
［2］李桂生，劉巖，劉柯．水蒸氣蒸餾法對當歸揮發油提取過程中成分異構化的影響［Ｊ］．中成藥，2001，23(11)：784．
［3］李菁，葛發歡，黃曉芬，等．超臨界ＣＯ２萃取當歸揮發油的研究［Ｊ］．中藥材，1996，19(4)：187．
［4］李衛民，金波，馮毅凡．中藥現代化與超臨界流體萃取技術［Ｍ］．北京：中國醫藥科技出版社，2002．163．
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