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探討寶寶樂口服液對瘦素調節(jié)VMN神經元膜電位的影響
摘要: 目的 研究寶寶樂口服液對瘦素調節(jié)下丘腦腹內側核(VMH)神經元膜電位的影響。方法 利用紅外可視腦片膜片鉗技術記錄對照組、厭食組和治療組三組模型動物VMN神經元的膜電位，分析瘦素及寶寶樂口服液對VMN神經元膜電位的影響。結果 瘦素使三組動物大部分神經元去極化，各組間比較差異無顯著性。少數VMN神經元在瘦素作用下超極化，各組間比較差異亦無顯著性。但模型組VMN神經元的膜電位被瘦素去極化而導致自發(fā)放電增加的細胞比例增多，被瘦素超極化而自發(fā)放電減少的細胞比例減少，對瘦素無反應的細胞比例也減少；而治療組去極化、超極化和無反應的細胞數與對照組差異無顯著性。結論 寶寶樂口服液能夠通過影響降低VMN對瘦素的整體敏感性，使VMN發(fā)出適度的飽信號，從而恢復正常的食欲和攝食量。
關鍵詞: 寶寶樂口服液 下丘腦腹內側核 膜電位 膜片鉗
小兒厭食是常見的攝食行為異常，發(fā)生率約為12%～34%，對兒童生長發(fā)育影響較大，對小兒厭食發(fā)生發(fā)展及其特效療法的深入研究將有助于推動人類對攝食生理調控機制的進一步認識和提高兒童健康水平［1］。近20年來，國內學者廣泛使用以恢復脾胃運轉之機，使脾胃調和、脾運復健為主要目的的運脾法為治則，治療小兒厭食取得很好療效，并系統研究了運脾法對消化吸收功能的影響，在外周水平上證實運脾法對胃腸道的運動和分泌有顯著的調節(jié)作用［2］。在以往的研究中，我們采用病因模擬法成功制作了幼齡大鼠厭食模型［3］，并就運脾復方對該模型中樞和外周胃腸激素的調節(jié)作用［4］、對厭食大鼠下丘腦腹內側核（ventromedial hypothalamic nuclui，VMN）神經元外周攝食負反饋信息的敏感性的影響進行了研究，取得了一些成果［5］。為進一步探討小兒厭食癥的發(fā)病機制和運脾復方的作用機制，觀察了運脾復方寶寶樂口服液對瘦素調節(jié)VMN神經元膜電位的影響。
1 材料與方法
1.1 動物及分組
日齡35～40 d的SD大鼠45只，平均體質量(60±10)g（第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供），合格證號SCXK（軍）2007?07。隨機分為對照組、模型組和治療組，每組15只。所有動物均單籠飼養(yǎng)，自由進食水。
1.2 模型制備和藥物治療
按文獻方法［3］ 制做厭食大鼠模型。即用正常鼠飼料喂養(yǎng)對照組大鼠，用特制飼料喂養(yǎng)模型組和治療組大鼠。1周后特制飼料喂養(yǎng)的大鼠日攝食量下降30%以上，體質量下降15%以上，表明模型制備成功。從實驗第8天開始，治療組大鼠用運脾復方寶寶樂口服液（第四軍醫(yī)大學科西京醫(yī)院藥劑科提供，藥物組成：蒼術、焦山楂、黃芪、黨參、陳皮各10 g,白芍、決明子、煅龍骨、煅牡蠣各20 g）灌胃，每日1次，劑量為3.76 g/100 g(為臨床2倍等效量)，同時給予對照組和模型組大鼠等容積生理鹽水灌胃，連續(xù)3周。
1.3 膜片鉗記錄
大鼠腹腔注射10%(φ)水合氯醛（0.33 mL/100 g），麻醉后斷頭取腦，迅速置于冰水混合的細胞外液（NaCl 126，KCl 2.5，Na2HPO4 1.2， NaHCO3 24，Glucose 11.1，MgSO4 1.2，CaCl2 2.4，單位mmol·L-1，pH7.2～7.4，滲透壓濃度299 mOsm）中充氧（95%O2和5%CO2，下同）1 min，移至振動切片機（機槽內注滿持續(xù)充氧的冰水細胞外液）做200 μm厚的橫切面腦片，置入28 ℃持續(xù)充氧的細胞外液中孵育1 h，然后在正置纖維鏡（Axoskop I；Zeiss，Thornwood，NY）水浸鏡頭下進行可視膜片鉗記錄，膜片鉗放大器使用MultiClamp 700B（Axon Instruments，美國）。pClamp8軟件（Axon Instrument，Foster City，CA）用來記錄和分析數據。
全細胞記錄（whole cell patch）使用的電極內液成分(單位:mmol·L-1)為：K?gluconate132.3，NaCl 4，CaCl2 0.5，Hepes 10，EGTA 5，ATP?Mg 4，GTP?Na 0.5，Phosphocretin 10，pH 7.2～7.3，滲透壓280 mOsm，充灌電極后的電極電阻為6～8 MΩ。電極尖端與細胞膜形成高阻封接（達1～10 GΩ），然后吸破細胞膜，在電流鉗gapfree狀態(tài)下持續(xù)記錄膜電位，觀察瘦素（Leptin，50 nmol·L-1）對VMN神經元膜電位的影響，取給藥前5 min的基礎膜電位與給藥最后1min的膜電位進行比較。
所有的化學試劑和藥理試劑均購自Sigma公司。
1.4 統計學處理
實驗數據采用均數±標準差(±s) 表示,采用t檢驗和χ2檢驗,以P
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